動物實驗-抗氧化功能評價方法

1 動物試驗項目

1.1 老年動物

選取10個月以上的大鼠或8個月以上的小鼠，根據(jù)血液中MDA水平分組，隨機(jī)分為1個溶劑對照組和3個供試品劑量組。三個劑量組給予不同濃度的試驗樣品，對照組給予相同體積的溶劑，1次/d，連續(xù)30天。實驗結(jié)束時處死動物，測定脂質(zhì)氧化產(chǎn)物含量、蛋白質(zhì)羰基含量、還原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

1.2 D-半乳糖氧化損傷模型

1.2.1 原理：D-半乳糖供過于求，超常產(chǎn)生活性氧，打破遺傳模型控制的活性氧產(chǎn)生和消除平衡，引起過氧化作用。

1.2.2 造模方法：選取健康成年小鼠25-30g。除空白對照組外，其余動物頸背皮下或腹腔注射D-半乳糖40mg-1.2g/kg BW。用量0.1mL/10g，每日1次，連續(xù)造模6周，測血MDA含量，按MDA水平分組。隨機(jī)分為1個模型對照組和3個試驗樣品劑量組。 3個劑量組口服不同濃度的試驗樣品，模型對照組給予相同體積的溶劑。對照組和各劑量組繼續(xù)在頸后皮下或腹腔內(nèi)注射相同劑量的D-半乳糖。實驗結(jié)束時處死動物，測定脂質(zhì)氧化產(chǎn)物含量、蛋白質(zhì)羰基含量、還原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

1.3 乙醇氧化損傷模型

1.3.1 原理：攝入大量乙醇，激活氧分子產(chǎn)生自由基，導(dǎo)致組織細(xì)胞發(fā)生過氧化作用，體內(nèi)還原型谷胱甘肽耗竭。

1.3.2 造模方法：選取25-30g健康成年小鼠（180-220g大鼠）隨機(jī)分為4組，1個模型對照組和3個試驗樣品劑量組，必要時可加空白對照組。 3個劑量組給予不同濃度的試驗樣品，模型對照組給予相同體積的溶劑30天。進(jìn)食16小時（過夜）后，50%乙醇12ml/kg BW灌胃一次，6小時后取樣（空白對照組不做處理，空腹取樣），測定血清或肝組織中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物和蛋白質(zhì)的含量。羰基含量、還原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

2 實驗原理

2.1 動物實驗和人體食品試驗所列指標(biāo)均為強(qiáng)制性項目。

2.2 脂質(zhì)氧化產(chǎn)物指標(biāo)中可選用丙二醛和血清8-表氫異前列腺素測定，動物實驗抗氧化酶指標(biāo)中的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶可選用氧化酶進(jìn)行指標(biāo)測定。

2.3 選擇氧化損傷模型動物和老年動物之一進(jìn)行生化指標(biāo)測定。

3 動物試驗結(jié)果的確定

若化學(xué)制品、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物、抗氧化酶、抗氧化物質(zhì)四項指標(biāo)中三項為陽性，則可判定供試品抗氧化功能動物試驗結(jié)果為陽性。